عنوان اختراع: ساخت پلاسمید تولید كننده ماركر DNA

خلاصه اختراع

كنترل استاندارد وزن مولكولی DNA، به طور معمول همراه با نمونههایDNA ، در آزمایشگاههای زیست شناسی مولكولی بر روی ژل قرار میگیرد و الكتروفورز میشود تا به عنوان مرجع وزن مولكولی DNA عمل كند. هضم آنزیمی DNA ژنومی، پلاسمید و تكثیر با روش PCR از جمله اصلی‌ترین گزینه‌ها برای تولید انواع ماركرهای تجاری مختلف محسوب میشوند، كه هر كدام دارای معایب بسیاری هستند. در این اختراع ما یك روش جدیدی برای ساخت پلاسمید تولید كننده ماركر DNA معرفی نموده‌ایم، كه شامل تكثیر قطعات DNA دارای توالیهای همپوشان توسط PCR و اتصال این قطعات به یكدیگر برای ایجاد وكتور نوتركیب است. در این روش، برای ساخت قطعات با وزن‌های متفاوت از پرایمرهای دارای جایگاه آنزیم‌هایEcoR1 و Bbs1 استفاده شد كه بعد از تیمار توسط آنزیمBbs1 و ساخت وكتور نوتركیب، تنها با یك واكنش برش توسط آنزیم EcoR1 ماركر DNA ایجاد میشود. به منظور یكسان سازی غلظت‌های هر یك از باندها تعداد متفاوتی از هر یك از قطعات درون وكتور قرار داده شد. از این نشانگر وزن مولكولی DNA، میتوان برای اندازگیری دقیق سایز باندهایDNA ، با طول 100 تا 3000 جفت باز، كه یك محدوده‌ی مناسب برای بسیاری از قطعات در طول الكتروفورز است، استفاده كرد. كنترل استاندارد وزن مولكولی DNA، به طور معمول همراه با نمونههایDNA ، در آزمایشگاههای زیست شناسی مولكولی بر روی ژل قرار میگیرد و الكتروفورز میشود تا به عنوان مرجع وزن مولكولی DNA عمل كند. هضم آنزیمی DNA ژنومی، پلاسمید و تكثیر با روش PCR از جمله اصلی‌ترین گزینه‌ها برای تولید انواع ماركرهای تجاری مختلف محسوب میشوند، كه هر كدام دارای معایب بسیاری هستند. در این اختراع ما یك روش جدیدی برای ساخت پلاسمید تولید كننده ماركر DNA معرفی نموده‌ایم، كه شامل تكثیر قطعات DNA دارای توالیهای همپوشان توسط PCR و اتصال این قطعات به یكدیگر برای ایجاد وكتور نوتركیب است. در این روش، برای ساخت قطعات با وزن‌های متفاوت از پرایمرهای دارای جایگاه آنزیم‌هایEcoR1 و Bbs1 استفاده شد كه بعد از تیمار توسط آنزیمBbs1 و ساخت وكتور نوتركیب، تنها با یك واكنش برش توسط آنزیم EcoR1 ماركر DNA ایجاد میشود. به منظور یكسان سازی غلظت‌های هر یك از باندها تعداد متفاوتی از هر یك از قطعات درون وكتور قرار داده شد. از این نشانگر وزن مولكولی DNA، میتوان برای اندازگیری دقیق سایز Making plasmid producing DNA marker