عنوان اختراع: فرایند استخراج ویروس و RNA گیاهی با استفاده از نانو ساختارهای كربنی

خلاصه اختراع

خلاصه طرح استخراج ویروس و آر ان ای گیاهی با استفاده از نانو ساختارهای كربنی در بین نانو ساختارهای گوناگون نانولوله‌های كربنی به دلیل خواص بالقوه ضد میكروبی از اهمیت ویژه‌ای برخوردار هستند. در بین این خواص، فعالیت ضد میكروبی نانولوله‌های كربنی به دلیل مكانیسم كاملا متفاوت با سایر مواد توجه این گروه تحقیقاتی را به خود معطوف كرده است. نانولوله‌های كربنی با ایجاد شكاف در دیواره سلولزی گیاه و همچنین تخریب غشاء پلاسمایی سلول باعث بیرون ریختن كامل آر ان ای و دی ان ای از سلول می‌شود. علاوه بر این، نانولوله ها باعث تخریب پوشش كپسیدی ویروس (پروتئین پوششی ویروس) می‌شوند. از سوی دیگر، در روش فوق‌الذكر مراحل استخراج ژنوم در مدت زمان بسیار كمتر نسبت به روش‌های دستی در غایب هرگونه مواد شیمیایی خطرناك انجام می‌گیرد. فرایند انجام گرفته جهت استخراج ژنوم گیاه به شرح زیر می‌باشد. ابتدا برگ‌های جمع آوری شده به مقدار 40 میلی گرم در ازت مایع خرد می‌شود. سپس 100 میكرو لیتر سوسپانسیون نانولوله های كربنی حاوی ستیل تری متیل آمونیوم بروماید با 40 میلی گرم بافت به همراه 200 میكرو لیتر كلروفرم مخلوط می‌شود. 15 ثانیه ورتكس و 5 دقیقه روی یخ قرار داده می‌شود. سپس مخلوط به مدت 15 دقیقه در دمای °C4 و 12000 دور بر دقیقه در سانتریفیوژ قرار داده می‌شود. بعد از سانتریفیوژ، فاز بالایی را به یك میكرو تیوب جدید منتقل كرده و هم حجم آن ایزو پروپانول اضافه می‌شود. بعد از 4 بار سر و ته كردن، در °C 20- به مدت 30 دقیقه قرار داده می‌شود. سپس سانتریفیوژ در 12000 دور بر دقیقه و برای 10 دقیقه در دمای °C4 تنظیم می‌شود. بعد از این عملیات، سوپرناتانت را حذف و با اضافه كردن یك میلی لیتر الكل 80 درصد، حل می‌شود. مجددا سانتریفیوژ در 12000 دور بر دقیقه و دمای °C4 به مدت 5 دقیقه تنطیم می‌شود. بعد از اتمام سانتریفیوژ، مجددا سوپرناتانت حذف و پلت خشك می‌شود. سپس آن را در 20 میكرو لیتر آب دپسی حل و آن را در °C 80- به مدت طولانی قرار داده می‌شود. باند bp 300 كه بر روی ژل آكاروز یك درصد ریخته (load) شده است، بر اساس پرایمرهای تخصصی طراحی شده‌اند و مخصوص ویروس بیت بلك اسكورچ (Beet Black Scorch Virus) می‌باشند كه تاییدی بر استخراج دقیق آر ان ای ویروس مورد نظر می‌باشد (شكل 1). از این دستاورد می‌توان در ساخت كیت های استخراج ژنوم با كیفیت و كمیت بالا در علومی همچون بیوتكنولوژی كشاورزی، گیاه پزشكی، دامپزشكی، پزشكی و تمامی علوم مرتبط با بیولوژی موجود زنده استفاده كرد.